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干式恒溫器雙模塊NAI-GSHWQ2采用干式恒溫加熱器微電腦控制的恒溫金屬浴裝置,利于高純鋁材料做為導(dǎo)熱介質(zhì),以替代傳統(tǒng)的水浴裝置,具有控溫精度高,制樣平行性好等優(yōu)點,可廣泛應(yīng)用于樣品的保存和反應(yīng)、DNA擴增和電泳的預(yù)變性、血清凝固等。
應(yīng)用范圍 Application range
廣泛應(yīng)用于酶制劑反應(yīng),血清滅活試驗,Rh血樣研究,交叉配血,以及膽固醇的鑒定檢測等多個領(lǐng)域
1.試驗名稱 常以項目的英文縮寫來設(shè)置,如總蛋白設(shè)置為TP,白蛋白設(shè)置為ALB等。
2.方法類型 生化分析儀常用的方法有終點法、連續(xù)監(jiān)測法、比濁法等,根據(jù)被檢物質(zhì)的檢測原理等選擇其中一種分析方法。
2.1終點法 又稱為平衡法,干式恒溫加熱器是基于反應(yīng)達到平衡時反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特征及其對光吸收強度的大小對物質(zhì)進行定量分析的一類方法,有一點終點法和兩點終點法兩類。一點終點法的特點是使用一種或兩種試劑,當(dāng)待測物與試劑反應(yīng)達到終點時,測定混合溶液的吸光度來計算待測物的濃度,該法常用的有總蛋白雙縮脲法、白蛋白溴甲酚綠法、葡萄糖氧化酶法等,手工操作的大多數(shù)方法都是一點終點法。兩點終點法也稱固定時間法,如果是單試劑分析,當(dāng)測定波長同干擾物質(zhì)的吸收光譜有重疊時,通過選用兩點終點法可消除樣品空白引起的干擾,其分析過程是在樣品與試劑混合后經(jīng)過一段延滯期讀取一個點A1,一定時間后再讀取A2,然后比較標(biāo)準(zhǔn)和測定的ΔA(ΔA=A2-A1)值,求得待測物的濃度。肌酐苦味酸法就是一個典型的單試劑兩點法的例子。如果是雙試劑分析,選用二點終點分析法除了可消除樣品空白引起的干擾外,還可消除內(nèi)源性干擾物質(zhì)的干擾,其分析過程是加入試劑1后讀取A1,加入試劑2后讀取A2,A1相當(dāng)于讀出樣品空白值,A2才是實際呈色反應(yīng),然后比較標(biāo)準(zhǔn)和測定的ΔA(ΔA=A2-A1)值,求得待測物的濃度。為了提高終點法檢測的準(zhǔn)確性,選擇該法時應(yīng)設(shè)置終點法零點讀數(shù)、樣品空白等兩個分析參數(shù),干式恒溫加熱器前者是在反應(yīng)前即開始讀數(shù),可以扣除反應(yīng)前試劑和樣品混合液的空白讀數(shù);后者是樣品加空白試劑所得到的吸光度,反應(yīng)需要占用一個比色杯。 http://www.bf324.com
2.2連續(xù)監(jiān)測法 干式恒溫加熱器 又稱動態(tài)分析法、速率法等,基本原理是在酶促反應(yīng)的最適條件下,用物理、化學(xué)或酶促反應(yīng)的分析方法,在反應(yīng)速度恒定期(零級反應(yīng)期)內(nèi)連續(xù)觀察和記錄一定反應(yīng)時間內(nèi)底物或產(chǎn)物量的變化,以單位時間酶反應(yīng)初速度計算出酶活力的大小和代謝物的濃度。具體方法有兩點速率法和多點速率法:兩點速率法是通過觀察在零級反應(yīng)期內(nèi)兩個時間點的吸光度,用兩個點的吸光度的差值(ΔA)除以時間(分),計算出每分鐘的吸光度變化值;多點速率法是在零級反應(yīng)期內(nèi)每隔一定時間(2-30s)進行一次監(jiān)測,連續(xù)監(jiān)測多次,求出單位時間內(nèi)的反應(yīng)速度,這種方法又可分為最小二乘法、多點δ法、回歸法、帶速率時間法等。該法具有明顯的優(yōu)點就是大大提高了分析速度和準(zhǔn)確性,主要適用于酶活性及其代謝產(chǎn)物的測定。在連續(xù)監(jiān)測法過程中,即使不加樣品,試劑中的底物也會自動降解得到一個結(jié)果,因此應(yīng)設(shè)置試劑空白速率,不同批號試劑的試劑空白速率不一樣,其值為以水代樣品測得的項目結(jié)果,樣品測定結(jié)果應(yīng)扣除試劑空白速率的數(shù)值。
2.3比濁法 干式恒溫加熱器自動生化分析儀一般只能做透射免疫比濁分析,當(dāng)光線通過一定體積的含免疫復(fù)合物的溶液時,由于溶液中存在的抗原-抗體復(fù)合物粒子對光線的反射和吸收,引起透射光的減少,測定的光通量和抗原抗體復(fù)合物的量成反比。它常用于終點法測定,目前主要用于血清特種蛋白的檢測,如載脂蛋白、微量蛋白、急性時相反應(yīng)蛋白、免疫球蛋白以及某些藥物監(jiān)測等。但是如果樣品中待測抗原濃度過高,抗原與抗體形成的免疫復(fù)合物分子將會變小,而且易發(fā)生解離,使?jié)岫确炊陆,因此免疫比濁分析過程中必須設(shè)置前區(qū)檢查,比較分析過程中后兩個讀數(shù)點的差別,如果后一點比前一點的吸光度低,則表示抗原已過剩,應(yīng)將樣品稀釋后重測。
3.反應(yīng)溫度 自動干式恒溫加熱器生化分析儀通過溫度控制系統(tǒng)保持溫度恒定,以保證反應(yīng)的正常進行,其保持恒溫的方式有三種:干式恒溫器加熱、水浴式循環(huán)加熱、恒溫器循環(huán)間接加熱。恒溫控制器可以對25℃、30℃、37℃三種溫度進行恒溫,根據(jù)需要可以任意選擇,半自動生化分析儀恒溫器屬于這種。全自動生化分析儀的溫度控制器一般只能控制37℃一種溫度,少數(shù)也可以控制30℃和37℃兩種溫度。
4.反應(yīng)波長 當(dāng)測定體系中只有一種組分或混合溶液中待測組分的吸收峰與其他共存物質(zhì)的吸收波長無重疊時,可選用單波長,如果待測物質(zhì)有幾個吸收峰,可選用吸光度最大的一個波長,或者選擇在吸收峰處吸光度隨波長變化較小的某個波長。當(dāng)被檢溶液混濁或存在較多的干擾物質(zhì)時,測定過程中會出現(xiàn)光散射和非特異性光吸收,從而影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性,此時可用雙波長甚至多波長測定,以提高測定結(jié)果的準(zhǔn)確性,而在實際應(yīng)用中選擇輔助波長主要用于消除脂血、溶血、黃疸的干擾。由于脂質(zhì)、血紅蛋白、膽紅素在較寬的波長范圍內(nèi)有較強的光吸收,常常同測定波長有重疊,此時測得的吸光度包含待測物質(zhì)的吸光度和干擾物質(zhì)的吸光度,因此必須選用合適的輔助波長來消除干擾物質(zhì)的吸光度。輔助波長的設(shè)置原則是根據(jù)測定波長選擇輔助波長,要求干擾物質(zhì)在測定波長同輔助波長有相同的吸光度。
5.反應(yīng)方向 有正向反應(yīng)和負向反應(yīng)兩種,反應(yīng)過程中吸光度增加為正向反應(yīng),吸光度下降為負向反應(yīng)。
6.樣品量與試劑量 樣品與試劑量的確定一般按照試劑說明書上的比例,并結(jié)合儀器的特性進行設(shè)置,亦可根據(jù)手工法按比例縮減或重新設(shè)計,但要考慮到檢測靈敏度、線性范圍,盡可能將樣品稀釋倍數(shù)大些,以降低樣品中其他成分的影響。在樣品與試劑量的設(shè)置過程中主要應(yīng)注意以下幾個方面:①稀釋水量,添加樣品稀釋水的是為了洗出粘附在采樣針內(nèi)壁上的微量血清,減少加樣誤差,添加試劑稀釋水是為了避免試劑間的交叉污染,兩種稀釋水的量應(yīng)在復(fù)溶試劑時按比例扣除。