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從儀器構(gòu)成來(lái)說(shuō),普通PCR儀主要由熱循環(huán)系統(tǒng)組成,熒光定量PCR儀和數(shù)字PCR儀除了熱循環(huán)系統(tǒng)外,還含有光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)以及配套的操作分析軟件! 乜匦阅苁荘CR反應(yīng)最重要的影響因素之一 由PCR原理也可看出,PCR反應(yīng)是不斷升溫和降溫的過(guò)程。需要能在變性-退火-延伸這三個(gè)關(guān)鍵步驟進(jìn)行溫度控制。溫度控制涉及溫度準(zhǔn)確性、干式恒溫加熱器均一性、升降溫速率、溫度梯度等多個(gè)方面! 囟葴(zhǔn)確性是PCR儀的重要性能指標(biāo)。如果儀器溫度準(zhǔn)確性差,樣品槽的實(shí)際溫度不能達(dá)到設(shè)定溫度,那就無(wú)法獲得預(yù)期的擴(kuò)增結(jié)果,即要么擴(kuò)增不出來(lái),要么產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增甚至是錯(cuò)誤擴(kuò)增! 囟染恍允谦@得穩(wěn)定擴(kuò)增的保障。若PCR儀的溫度均一性差,在出現(xiàn)不同擴(kuò)增結(jié)果時(shí)就無(wú)法判斷是樣品本身不同造成還是儀器性能不好所導(dǎo)致! ∩禍厮俾什粌H直接影響PCR實(shí)驗(yàn)用時(shí),進(jìn)而影響工作效率,還會(huì)影響擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性。升降溫速率越快,特異性越好! CR儀梯度溫度功能對(duì)于反應(yīng)條件的優(yōu)化(尤其是退火溫度的優(yōu)化)有很大幫助。對(duì)于新開(kāi)展的實(shí)驗(yàn),通過(guò)溫度梯度功能快速獲得最佳退火溫度! 悠凡鄄馁|(zhì)影響溫控性能 PCR儀樣品槽的材質(zhì),會(huì)影響上述這幾個(gè)溫控方面性能。現(xiàn)在大多數(shù)PCR儀采用的是鋁合金材質(zhì)樣品槽,高端PCR儀則采用熱導(dǎo)性能更好的銀質(zhì)樣品槽! 」鈱W(xué)檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生很大影響干式恒溫加熱器 對(duì)于熒光定量PCR儀來(lái)說(shuō),光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)的好壞對(duì)檢測(cè)結(jié)果會(huì)產(chǎn)生很大影響。光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)主要包含激發(fā)光源、檢測(cè)器、信號(hào)采集方式、檢測(cè)通道數(shù)量等方面! 〖ぐl(fā)光源需考慮光譜范圍和光強(qiáng)。雖然現(xiàn)在新一代產(chǎn)品的激發(fā)光源大多都是LED燈,但單色LED燈和復(fù)合光白色LED燈,在激發(fā)效果上還是各有優(yōu)劣。最好能利用各自的優(yōu)勢(shì)形成既寬又強(qiáng)的光照激發(fā)效果。